摘要：
随着现代生物医学的发展，对肿瘤分子机制的研究逐渐发展起来。CD147基因已应用于肿瘤分子靶向治疗，发现CD147基因在不同肿瘤组织和正常组织中的表达存在显着差异。许多先前的研究也表明，CD147基因的表达在肿瘤的发展中起着至关重要的作用。为了解CD147能否作为口腔癌的治疗靶点，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除cal27细胞中的CD147基因，获得敲除细胞系。使用CCK-8、Transwell、RT-PCR和Western印迹，敲除细胞系的增殖和侵袭能力显着降低，基质金属蛋白酶的表达也受到抑制。下一个，构建裸鼠以检测CD147基因对肿瘤的影响。皮下肿瘤生长和免疫组化结果显示，与野生型组相比，敲除细胞系的增殖和阿霉素耐药性明显受到抑制。这些结果表明，敲除CD147显着降低了cal27细胞的增殖和侵袭，CD147可能是口腔癌的潜在治疗靶点。
介绍
口腔癌是世界范围内发病率、死亡率和复发率较高的常见恶性肿瘤，是全球六大常见癌症之一。五年生存率约为50%。口腔癌是一种侵袭性肿瘤，主要侵犯口腔上皮细胞，可能发生转移，甚至导致死亡。最近的研究表明，全世界年轻人中口腔和口咽癌的发病率正在增加。阐明口腔癌的发生发展机制，寻找新的治疗方法，对口腔鳞癌患者的治疗和预后具有重要意义。肿瘤的侵袭性和转移性是其不能完全治愈的主要原因。因此，确定影响肿瘤侵袭和转移的关键因素非常重要。为了实现这一点，近年来的许多研究都集中在如何抑制肿瘤侵袭上。科学家们已经确定了几个与侵袭肿瘤能力相关的基因；CD147是其中之一。
EMMPRIN是一种位于细胞表面的糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族。随后的研究表明，EMMPRIN与其他几种蛋白质因子相同，包括BSG，目前一般称为CD147。CD147在各种肿瘤细胞表面过度表达，CD147还通过基底膜的重组促进人口腔鳞状细胞癌和肝癌细胞的侵袭。根据临床数据，CD147是50岁以上癌症患者的独立预后指标。许多临床和基础研究表明，CD147在癌症发展中起着至关重要的作用。但直到现在，没有具体的研究表明CD147基因对侵袭、增殖、阿霉素(DOX)耐药和口腔鳞状细胞癌的凋亡。因此，有必要探索CD147在口腔癌中的具体作用，以确定其作为口腔鳞状细胞癌治疗靶点的潜力。
迄今为止，CD147在各种肿瘤中过度表达，并介导MMP1、MMP2、MMP3、MMP9和MMP11在癌症侵袭和转移中的生物活性。根据最新研究，MMP7的表达也与CD147基因的表达和肿瘤进展密切相关。这些数据表明CD147可能是口腔癌的潜在治疗靶点。
在这项研究中，评估了CD147基因对肿瘤侵袭和转移的影响。总体策略是使用CRISPR/Cas9基因编辑工具禁用cal27细胞中的CD147基因。体外评价CD147基因敲除对细胞转移侵袭能力的影响。体内免疫组化结果揭示了cal27异种移植瘤在裸鼠体内的生长能力。这些结果表明成功构建了CD147基因敲除细胞，重要的是，CD147敲除在体外和体内降低了cal27肿瘤细胞的侵袭和转移（方案1）。
（图一）
方法与结果
本研究采用CRISPR/Cas9基因编辑技术创建CD147敲除Cal27细胞系（见图一）。结果显示，CD147敲除减少Cal27细胞的增殖和迁移（见图二）、抑制Cal27细胞的侵袭（见图三）、降低Cal27细胞凋亡（见图四）、抑制Cal27细胞的DOX抗性（见图二、三、四）；体外动物实验结果显示，Cas9-CD147Cal27细胞在口腔癌小鼠模型中表现出较慢的生长和较少的侵袭（见图五、六）。
（图二）
（图三）
（图四）
（图五）
（图六）
（图七）
结论
本研究利用CRISPR/Cas9基因敲除工具在体外和体内证明CD147敲除抑制口腔癌的增殖、侵袭和DOX耐药。因此，CD147有望成为治疗口腔癌的靶点。这项研究首次证明CRISPR基因编辑技术敲除CD147。虽然该技术可以有效检测CD147基因在口腔鳞癌cal27细胞中的生物学效应，但能否成为有效的治疗策略仍有待阐明。更重要的是，如何有效地利用CRISPR基因编辑技术，并将其应用于各种疾病的治疗是至关重要的。
