1. 大鼠经麻醉，腹主动脉取血处死后，用酒精对膝关节进行局部消毒，于膝关节正中纵行切开皮肤，分离肌肉，露出膝盖骨，继续向下分离，可见平滑光亮的滑膜组织，用手术剪分离关节囊的滑膜层和纤维层，然后取出滑膜，同法采集另一个膝关节滑膜。
2. 将滑膜放入装有PBS的EP管中，上下颠倒清洗，弃去PBS，重复两次。
3. 在EP管中用手术剪将滑膜尽量剪碎，用胰酶消化15~20min，加入2倍量的无血清培养基终止消化，去除培养基，再加入2倍量的培养基，将胰酶完全除去。
4. 把滑膜移到25 mL flask中，尽量使滑膜平铺在瓶底，避免因重叠而贴壁不牢，易被培养基冲起，将flask直立放入细胞培养箱中孵育3 h。
5. 取出flask，加入完全培养基后，将flask平放于细胞培养箱中。
6. 隔日观察组织贴壁情况。若有轻微污染，更换培养基，观察。
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