摘要：
对免疫检查点蛋白程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA4)的治疗性阻断已经改变了癌症的治疗。然而，对这些治疗的总体应答率很低，这表明免疫检查点激活并不是导致抗肿瘤免疫功能失调的唯一机制。在这里，我们发现亲丁素样蛋白2(BTNL2)是一种有效的抗肿瘤免疫反应的抑制因子。抗体介导的BTNL2阻断可减弱多个体内小鼠肿瘤模型中的肿瘤进展，从而延长荷瘤小鼠的生存时间。在机制上，BTNL2与局部γδT细胞群相互作用，促进肿瘤微环境中IL-17A的产生。抑制BTNL2可以减少肿瘤浸润性的il-17a产生的γδT细胞和髓系来源的抑制细胞的数量，同时促进细胞毒性CD8+T细胞的积累。此外，我们发现在一些高流行癌症类型的人类肿瘤样本中，BTNL2的高表达，这与患者的总体生存率呈负相关。因此，作者的研究结果表明，BTNL2是抗肿瘤免疫的负调控因子，也是癌症免疫治疗的潜在靶点。
介绍
癌症免疫学最近的一项重大进展是在肿瘤微环境(TME)中发现了免疫抵抗机制，这有助于肿瘤逃避免疫监视。例如，众所周知，由肿瘤浸润性T细胞产生的IFN-γ可增强免疫检查点分子如PD-L1（CD274、B7-H1）的表达，从而使效应T细胞上的同源受体参与促进衰竭和细胞凋亡。抗体介导的PD-1/PD-L1和/或CTLA-4免疫检查点分子阻断可逆转T细胞功能障碍并恢复有效的抗肿瘤免疫反应。这种策略，通常称为免疫检查点阻断(ICB)，已被批准用于治疗多种癌症类型。尽管在一些患者对目前可用的ICB治疗的反应中看到了显着的结果，但总体反应率仍然低得令人失望。研究表明，在人类实体瘤中观察到的免疫功能障碍中，不到40%是PD-1/PD-L1通路造成的，越来越多的证据表明，其他机制导致TME中抗肿瘤免疫功能失调。因此，阐明癌症免疫逃避的其他机制既可以帮助我们了解ICB治疗反应，也可以提供新的靶点来改善癌症的免疫治疗方法。
γδT细胞是一种非主要组织相容性复合体(MHC)限制性淋巴细胞亚群，与先天免疫密切相关。γδT细胞优先定位于富含上皮的组织，例如肠道、皮肤和肺。γδT细胞识别在细胞应激反应期间表达的不依赖MHC的非肽抗原。γδT细胞也已被证明通过多种效应机制执行抗肿瘤细胞毒性反应，包括产生和释放IFN-γ，以及穿孔素和颗粒酶家族成员17。然而，在某些情况下，γδT细胞也被证明能够通过产生IL-17A来促进肿瘤生长。事实上，最近的多份报告已经描述了γδT17细胞在小鼠模型和人类癌症中的肿瘤促进作用。在这些研究中，髓源性抑制细胞(MDSCs)被证明是促肿瘤γδT17细胞的关键下游靶点。MDSC是一种异质的抑制性先天免疫细胞群，它们在包括癌症在内的多种疾病状态下扩增。几份报告发现，在患有多种癌症（包括结肠癌和黑色素瘤）的患者的肿瘤中，MDSC群显着增加。此外，高水平的循环MDSC预示着对ICB治疗的不良反应，这表明MDSC可能在免疫逃逸中发挥作用。尽管已知MDSCs对多种类型的癌症具有明显的促进作用，但目前还没有批准的专门针对MDSCs的治疗剂。
Butyrophilin-likeprotein2(BTNL2)是一种跨膜免疫调节蛋白，在胃肠道中高度表达。BTNL2属于类嗜乳素蛋白家族，一些嗜乳素和嗜乳素样蛋白，如BTN2A1、BTN3A1、skint-1、BTNL1和BTNL6，已被证明在调节γδT细胞发育中起重要作用和微分27,28,29,30,31,32,33,34。BTNL2包含四个细胞外免疫球蛋白(Ig)结构域，由两个IgV-IgC结构域对组成35.先前的研究报道，BTNL2-Fc融合蛋白在体外直接抑制CD4+T细胞活化，尽管T细胞上BTNL2的同源受体仍然未知36、37。有趣的是，据报道，BTNL2的多态性变体与多种自身免疫性疾病和癌症的易感性有关，包括肺癌和前列腺癌。最近的一项临床研究发现，抗PD-1治疗后BTNL2和其他免疫检查点分子（包括CTLA-4）的表达增加，进一步表明BTNL2可能代表癌症免疫逃避的新机制。
在这项研究中，作者提供证据表明BTNL2通过作用于局部γδT细胞群以促进IL-17A的产生来抑制抗肿瘤免疫，从而通过募集MDSC增强肿瘤免疫抵抗。用新型单克隆中和抗体阻断BTNL2对多种小鼠肿瘤具有显着的治疗效果，并与抗PD-1阻断具有协同作用。重要的是，BTNL2在多种人类实体癌中表达，其表达水平与患者存活率呈负相关。总之，作者报告说BTNL2是一个有前途的癌症免疫治疗靶点，有可能提高当前可用免疫疗法的疗效，并可能为对当前癌症免疫疗法耐药的患者提供替代的独立疗法。
方法与结果
我们生成了一个针对鼠BTNL2的大鼠单克隆抗体库，并进行了功能性体外筛选，确定了一个能够挽救BTNL2-Fc介导的抑制CD4+T细胞。实验结果显示，BTNL2阻断剂在多种小鼠模型中具有治疗性抗肿瘤作用（见图一）；BTNL2抑制减少肿瘤浸润γδT17（见图二、见图三）；BTNL2阻断减少MDSC群体的肿瘤内积累（见图四）；BTNL2的肿瘤表达在抗肿瘤免疫逃逸中起主要作用（见图五）；BTNL2在人类癌症中的表达与患者的预后和γδT17浸润相关（见图六、图七）；
（图一）
(图二)
（图三）
（图四）
（图五）
（图六）
（图七）
结论
在这里，本文已经证明BTNL2是一种有效的抗肿瘤免疫抑制剂，并通过以前未报道的调节γδT17细胞的作用发挥作用。然而，关于这个有希望的治疗靶点的几个问题仍然存在，应该在未来的研究中进行探索。例如，通过阐明BTNL2表达在TME中选择性上调的机制以及定义其在γδT细胞上的同源受体，将获得有用的见解。人和小鼠BTNL2显示出高蛋白保守性（氨基酸序列为64%），它们都含有两个细胞外IgC和两个IgV结构域36.人和小鼠BTNL2的高度保守性表明人和小鼠BTNL2可能通过相似的机制发挥作用，而人BTNL2的功能需要在未来的研究中进一步研究。我们的研究结果清楚地表明，BTNL2在不断扩大和增强癌症免疫治疗的努力中是一个有前途的治疗靶点。
文章出自：动物实验外包 想了解更多请关注：http://www.do-gene.com
