实验原理
细胞划痕法是测定细胞迁移运动与修复能力的常用方法,类似体外伤口愈合模型,故又称伤口愈合法。在体外将细胞培养在培养皿或平板上,当细胞长到融合成单层状态时,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为"划痕"。然后继续培养细胞,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使"划痕"愈合,每间隔一段时间(如间隔12小时),显微镜下拍照,记录细胞向中央空白区迁移情况,以此判断细胞的迁移能力。
方法和步骤
①在24孔板中分别接种8×10E4个细胞,常规条件培养,直至形成细胞单层。
②在单层细胞上,用10 μl规格的枪头沿培养板底部呈"一"字形划痕,用PBS清洗掉悬浮的细胞,清洗两次,加无血清培养液继续培养,同时拍照,记录划痕区域的相对距离。
③分别在12、24、36小时更换新鲜的无血清培养基,观察并拍照,记录各个时间点划痕区域的相对距离。
④测量迁移距离:用相关软件测量各个时间点同一区域的划痕距离,计算细胞实际迁移距离。
注意事项
(1)确保培养板内细胞为单细胞层。
(2)划痕时注意保持划痕区域边缘的平整。
(3)划痕时保持不同分组间划痕区域距离的一致性。
(4)不同细胞的迁移速度不同。
文章出自:细胞实验外包 想了解更多请关注:http://www.do-gene.com