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如何去做细胞划痕实验

作者:admin 浏览量:321 来源:本站 时间:2022-12-11 13:50:19

信息摘要:

实验原理细胞划痕法是测定细胞迁移运动与修复能力的常用方法,类似体外伤口愈合模型,故又称伤口愈合法。在体外将细胞培养在培养皿或平板上,当细胞长到融合成单层状态时,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为"划痕"。然后继续培养

实验原理

细胞划痕是测定细胞迁移运动与修复能力的常用方法,类似体外伤口愈合模型,故又称伤口愈合法。在体外将细胞培养在培养皿或平板上,当细胞长到融合成单层状态时,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为"划痕"。然后继续培养细胞,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使"划痕"愈合,每间隔一段时间(如间隔12小时),显微镜下拍照,记录细胞向中央空白区迁移情况,以此判断细胞的迁移能力。

方法和步骤

①在24孔板中分别接种8×10E4个细胞,常规条件培养,直至形成细胞单层。

②在单层细胞上,用10 μl规格的枪头沿培养板底部呈"一"字形划痕,用PBS清洗掉悬浮的细胞,清洗两次,加无血清培养液继续培养,同时拍照,记录划痕区域的相对距离。

③分别在12、24、36小时更换新鲜的无血清培养基,观察并拍照,记录各个时间点划痕区域的相对距离。

④测量迁移距离:用相关软件测量各个时间点同一区域的划痕距离,计算细胞实际迁移距离。

注意事项

(1)确保培养板内细胞为单细胞层。

(2)划痕时注意保持划痕区域边缘的平整。

(3)划痕时保持不同分组间划痕区域距离的一致性。

(4)不同细胞的迁移速度不同。

文章出自:细胞实验外包    想了解更多请关注:http://www.do-gene.com