细胞在，不远游，游必冻上。
游回，要复苏！
细胞冻存和复苏是细胞培养中的关键环节，直接影响细胞存活率和活力，所以一定要掌握好这一关键技术！！！
细胞复苏实验的原理和目的
细胞复苏是指将保存在液氮或-80℃冰箱中的细胞解冻，再进行后续的培养传代。为了确保成功复苏，应该采用快速融化的方法，这样可以避免细胞外结晶在较长时间内缓慢融化，导致水分渗入细胞内再次结晶，从而对细胞造成伤害，影响存活率。
细胞复苏步骤
1. 从-80℃超低温冰箱中取出所需复苏的细胞，将冻存管（装在pe手套）放入恒温水浴中（37℃）解冻，旋转解冻，注意，冷冻瓶的瓶口不要浸在液面以下，防止被污染；
2.将解冻后的培养瓶从传物仓传入细胞房（传物仓不能开紫外线）；
3.将细胞（带有冻存液）吸入到离心管中，并加入一定量的培养基（培养基与冻存液的比例为1：1），再将离心瓶放入离心机（时间5min，转速1000转），注意，将离心管的刻度朝外，这样离心后的细胞会吸附到刻度线测；
4.将离心管取出后，倒掉培养液（因为培养液中含有冻存液），用枪头吸干净，再加入1ml的培养基（用移液枪，并且枪口不能置入到离心管中，因为之前离心管中有冻存液），并用移液枪或巴士吸管将离心的细胞吹落（又称为重悬）；
5.将含有培养基的细胞分装至两个培养瓶（3-5ml），将培养瓶放入培养箱中。
6.观察和评估：在培养过程中，24 h内观察细胞的生长情况、形态特征和贴壁率等指标，以评估细胞复苏的成功与否。
细胞复苏注意事项
1. 已溶解的冻存细胞尽量短时间的在常温存放，尽快离心去除DMSO。
2. 细胞溶解过程快速摇晃以加速溶解。
3. 贴壁细胞复苏24小时后观察，若密度达到80%，则正常传代；若密度不到80%则继续培养到48小时再换液。
4. 温和解冻：使用适当的方法解冻细胞，如将冻存管放入37°C的水浴中直至完全解冻。避免使用高温或暴露时间过长的方法，以免对细胞造成热伤害。
5. 转移细胞过程需要全程置于干冰上，防止细胞提前缓慢融化。
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