目前,各大实验室关于细胞增殖检测实验的方法有很多,以下是我们常见的5种进行细胞增殖检测实验的方法:
细胞增殖检测实验方法1:MTT
我们都知道,活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶-甲瓒,并沉积在细胞中,而死亡的细胞无此功能,所以我们能使用MTT方法来进行细胞增殖实验方面的检测。
MTT进行细胞增殖检测的这种方法简便、灵敏而且无放射性,所以备受大家欢迎,只是,我们实验时需要注意的是,MTT溶液需4℃避光保存,最好现用现配,而且,甲瓒不溶于水,无法直接测定吸光度,需要被溶解之后才能检测才行,最后就是,MTT是可以用于贴壁细胞的增殖检测,但不适合悬浮细胞,一定要注意!
细胞增殖检测实验方法2:CCK-8
CCK-8的方法使用的是WST-8,它在电子耦合试剂的作用下可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原为高度水溶性的橙黄色甲臜,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系,也就是说,细胞增殖越多越快,则颜色越深。
CCK-8可直接加入细胞样品中,因此适合悬浮细胞和贴壁细胞的检测,而且,它对细胞几乎没有毒性, 检测完成后的细胞还可以继续培养使用。所以,其与MTT法相比,CCK-8法操作更简便,灵敏度、准确性和重复性也更好。
细胞增殖检测实验方法3:BrdU
BrdU能够代替正常的胸腺嘧啶参与细胞DNA复制过程,BrdU的特异性抗原可以用于检测BrdU的掺入,从而判断细胞的增殖能力。
这个方法不好的一点,就是实验中需要对双链DNA进行变性处理(酸变形、热变性等)。
细胞增殖检测实验方法4:EdU
EdU是BrdU的替代方法,无需特殊条件处理(酸解、热解等)。EdU是一种新型胸腺嘧啶核苷类似物,可以在DNA合成过程中替代胸腺嘧啶掺入到新合成的DNA中。通过点击反应,新合成的DNA会被相应的荧光探针标记,从而可以通过DNA的合成来反应细胞的增殖情况。
细胞增殖检测实验方法5:3H-TdR
3H-TdR掺入法胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的前体物,处于S期的细胞不断地摄取TdR用以合成DNA。是将放射性标记的3H-TdR掺入DNA合成期的细胞,细胞内3H-TdR掺入量的多少可客观反映细胞复制DNA能力的大小,从而间接了解细胞增殖情况。所以,这种细胞增殖检测实验方法又称为放射性核素标记法。
需注意的是,该方法需要一定的设备,并且容易造成环境污染,需要特殊处理。而且,试剂含有同位素,具有放射性,对实验者有一定的危害,对实验者操作要求较高,所以,非必要不建议使用这样的方法来检测细胞的增殖情况!
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