实验室经常要采购或者交换新细胞做实验,但是这中间细胞会出现很多的问题
1、收到细胞,显微镜观察细胞成片漂浮
很多系列的细胞在温度低的时候会回缩变圆,呈现漂浮状态,这时候建议可以延长稳定时间,约 4小时后观察。若细胞仍不贴壁,取出所有灌装培养基离心收集细胞,去上清将细胞弹散,在离心管中加入 1ml 胰酶轻轻混匀,将离心管平放(提醒:胰酶细胞悬液不要沾到瓶盖以免损失细胞),消化约3 分钟后加入 2-3ml终止液1000rmp,5min 离心,去上清将管底细胞团尽量弹散,加入完全培养基重悬(轻轻吹吸 1-2 次) 均匀转入2个 T25 中,摇后放入培养箱中培养。
2、贴壁细胞传代 2-3 次后增殖变慢,有黑点
出现这样的情况,很可能是消化过度导致了部分细胞的细胞膜受损凋亡,部分细胞细胞膜受到破坏,导致了细胞生长缓慢。
3、细胞出现空泡
出现这样的情况,大部分是有由于没有及时换液的原因导致的,不及时换液导致培养基酸度增强、营养成分降低,这时候就很容易产生空泡;当然,也不排除没有及时传代,细胞生长过密导致。
4、细胞形态改变
这个倒是不用太担心,因为刚收到的细胞,换了培养基或血清会有变形的情况,这个是属于正常情况的,因为细胞需要一定的适应过程,当体外培养时间长后,随着传代次数的增多,细胞形态也会有触角拉丝变瘦等变化响。
5、收到的细胞里有异物或传代后有异物
造成这样的原因可能有这2个,第一个是有的无血清培养基里添加了因子,是因子析出物或血清蛋白棉球纤维,凋亡细胞片等属于正常现象;第二个原因就是有的传代后细胞堆积成团,肉眼可见白色点状物,这应该是消化没有吹散开或消化过度细胞抱团自救的过程,这时候建议你可以细胞密度高后改善消化过程。
6、原代细胞增殖缓慢
需要清楚的是,原代细胞有一定程度密度依赖,如果形态正常、背景干净,我们就不用太担心,建议此时耐心培养,注意观察及时换液,密度达到一定程度生长会加快。
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