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17种常见蛋白标签的简介、原理及应用

作者:admin 浏览量:122 来源:本站 时间:2025-02-14 07:28:50

信息摘要:

一、Flag标签简介:Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽,标签序列为DYKDDDDK。原理:融合Flag的目的蛋白,可以直接通过Flag进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以高效纯化有活性的融合蛋白。作为融合表达标签,其通常不会与目的蛋白相互作用并且不会影响目的蛋白的功能、性质,有利于对融合蛋白进行下游研究。应用:


一、Flag标签

简介:Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽,标签序列为DYKDDDDK。

原理:融合Flag的目的蛋白,可以直接通过Flag进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以高效纯化有活性的融合蛋白。作为融合表达标签,其通常不会与目的蛋白相互作用并且不会影响目的蛋白的功能、性质,有利于对融合蛋白进行下游研究。

应用:蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用;蛋白检测和定位;流式细胞术。

 

二、GST标签

简介:GST(谷胱甘肽疏基转移酶)标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为26KD,是一个较大的标签。

原理:GST标签的工作原理基于其与谷胱甘肽的高亲和性。在固相基质上通过巯基结合一个谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶之间的特异性作用力,使得带GST标签的融合蛋白与基质上的谷胱甘肽结合,达到分离纯化的目的。

应用:各种融合蛋白的表达;亲和层析纯化;Pull-down检测:蛋白质之间相互作用研究;蛋白质结晶学;酶学分析;免疫检测。

 

三、His6标签

简介:His标签通常是包含6至10个组氨酸残基的多肽序列。His6是最常见的His标签序列是六个组氨酸残基,即His-His-His-His-His-His,通常简写为6xHis。标签的分子量小,只有0.84KD。

原理:His标签蛋白纯化通常采用固定化金属离子亲和层析(IMAC)纯化的方法,主要利用介质配体螯合的金属离子吸附纯化表面带组氨酸残基的蛋白。由于His标签可与多种金属离子(如 Ca2+、Mg2+、Ni2+、Cu2+,Fe2+等)发生特殊的相互作用,所以可利用蛋白质表面的特性,使之被吸附在凝胶柱上,从而达到分离纯化蛋白的目的。

应用:蛋白纯化优选;检测和定位;亲和层析纯化;蛋白结晶标签;蛋白质之间相互作用研究。

 

四、HA标签

简介:HA标签是一个小分子多肽序列。通常包含9个氨基酸,标签序列为YPYDVPDYA。

原理:HA标签具有高亲和性,实验者通常使用抗HA标签的抗体来结合含有HA 标签的蛋白质,在蛋白的C端或N端添加HA标签可以方便地通过HA标签特异性抗体对其进行检测、分离和纯化。

应用:蛋白纯化;蛋白免疫印迹;免疫沉淀;免疫荧光技术;酶联免疫吸附测定;流式细胞术。

 

五、C-Myc标签

简介:C-Myc标签蛋白,是一个含11个氨基酸的小标签,标签序列Glu-GIn-Lys-Leu-le-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。

原理:C-Myc标签具有高亲和性,可选择性结合抗体。实验者通常使用抗C-Myc标签的抗体来结合含有C-Myc标签的蛋白质,以实现蛋白质的检测和纯化。

应用:Western-Blot杂交技术;免疫沉淀;流式细胞术;检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。

 

六、SNAP标签

简介:SNAP-Tag是一个相对较小的标签,其核心序列包含约20个氨基酸残基,该序列用于与标签物质共价结合。

原理:SNAP-Tag能够与被修饰的标签物质进行共价结合,形成稳定的连接。这个共价结合是可逆的,因此可以在不影响蛋白质功能的情况下,实现对SNAP-Tag的不同标签物的切换,实现一个标签,多种标记。

应用:蛋白质的标记与定位;活细胞成像;蛋白质交互作用研究。

 

七、SUMO标签

简介:SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白。在一级结构上SUMO与泛素只有18%的同源性,然而两者的三级结构及其生物学功能却十分相似。SUMO标签通常包含约11个氨基酸残基,其典型序列为KxE(4表示大疏水氨基酸,K表示赖氨酸,x表示任意氨基酸)。

原理:SUMO可与目标蛋白质中特定赖氨酸残基实现共价连接。SUMO标签被共价连接到目标蛋白质上,这种连接是可逆的,允许SUMO标签在需要时被去之除。SUMO标签常通过SUMO酶系统催化添加或去除。

应用:作为泛素类多肽链超家族的重要成员之一,可提高目的蛋白表达量和溶解度;亲和层析纯化;蛋白质纯晶学;蛋白质交互作用研究。

 

八、Avi标签

简介:Avi标签蛋白是一个15个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨,酸位点与已知天然可生物素化序列完全不同,可以加在目标蛋白的N端和C端。融合表达后,可被生物素连接酶生物素化,为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白行生物,除了用于蛋白质分离纯化,还用于蛋白质相互作用研究。

原理:由于BirA酶对生物素的亲和性,当Avi标签与BirA酶相结合时,BirA酶能够催化生物素与Avi标签之间的共价连接。这种连接是比较稳定的,可以用于蛋白质的标记和纯化。

应用:蛋白质之间相互作用;蛋白质标记与纯化。

 

九、MBP标签

简介:MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的ma1E基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。

原理:麦芽糖结合蛋白能够被多糖树脂吸附,因此在过柱时,能够使融合蛋白与其它蛋白成份分离。如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。检测方法可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。

应用:检测定位蛋白质;提高目的蛋白表达量和溶解度。

 

十、Strep标签

简介:由8个氨基酸构成的小肽序列,其典型序列为WSHPOFEK。因为它的分子量很小,所以不会遮盖融合蛋白中其他的蛋白表位和结构域,更不容易改变融合蛋白的功能、分泌或是运输。

原理:主要基于Strep标签和Strep-Tactin之间的高亲和性。Strep-Tactin是一种天然存在的蛋白质,可高度特异性地结合Strep标签。通过将Strep标签融合到目标蛋白质上,可以使用Strep-Tactin树脂实现对带有Strep标签的蛋白质的选择性纯化。

应用:蛋白质的检测和定位;流式细胞术;蛋白质之间的相互作用;亲和层析纯化。

 

十一、V5标签

简介:V5标签通常包含14个氨基酸残基,是一个相对较小的多肽序列,其典型序列为GKPIPNPLLGLDST。

原理:V5标签具有高亲和性,实验者通常使用抗V5标签的抗体来结合含有V5标签等的蛋白质,以实现蛋白质的检测和纯化。

应用:蛋白质的检测与定位;流式细胞术;亲和层析纯化;蛋白质的研究和定量分析。

 

十二、BiolD标签

简介:是一个短小的肽序列。

原理:与Avi标签类似,都依赖于BirA酶对生物素的亲和性。BirA酶能够催化生物素与BioID标签附近蛋白质中的任何潜在位点的共价连接。这种连接是可逆的,可以用于蛋白质相互作用的研究。

应用:亲和纯化实验;蛋白质相互作用研究

 

十三、CBP标签

简介:是一个包含约15个氨基酸残基的短小肽序列。

原理:其与Cox-2酶具有高亲和性。CBP标签与Cox-2结合形成一个稳定的复合物。

应用:蛋白质的标记和纯化;蛋白质相互作用研究。

 

十四、T7标签

简介:T7标签通常包含11个氨基酸残基。其典型序列是11个氨基酸的多肽序列。其大小相对较小。

原理:可与T7RNA聚合酶的特异性结合。T7标签被用于标记目标蛋白质,后与 T7RNA聚合酶形成复合物。这个复合物可以被用于进行T7RNA聚合酶介导的转录实验。

应用:RNA亲和纯化;蛋白质与RNA的相互作用研究;In vitro转录

 

十五、S标签

简介:S标签包含9个氨基酸残基,是一个相对小的多肽标签。其典型序列为KETAAAKFERQ。

原理:S标签可与与S蛋白的特异性结合。S标签可以通过免疫球蛋白结构域与相应的S蛋白结合形成复合物。这种结合是高度特异性的,可用于蛋白质的标记和纯化。

应用:亲纯和化;免之疫检测;蛋白质之间的相互作用。

 

十六、eCFP标签

简介:eCFP标签蛋白为增强型青色荧光蛋白eCFP,激发波长为433nm或453nm,发射波长为475nm或501nm,其是由野生型青色光蛋白CFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。相对于CFP,eCFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。

原理:eCFP不用破碎组织细胞并且不加任何底物,直接通过光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针。其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况。同时细胞内的其它产物不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性。

应用:基因表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。

 

十七、Halo标签

简介:Halo标签蛋白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物,可与多种合成的Halo Tag配基有效地共价结合。这个分子量为33KDa的单体蛋白能融合在重组蛋白的N端或C端,并在原核和真核系统中表达。

原理:Halo标签蛋白配基是小分子化学物,能够在体外或体内与Halo标签蛋白共价结合(区别于一般Tag的非共价结合,其强结合facilitate强的洗脱作用以去除非特异信号)。这些配基由两个关键组分组成:①一个通用的Halo标签蛋白反应联结子,结合Halo标签蛋白;②一个功能基团,例如荧光染料或亲和媒介。

应用:能够共价和特异性结合多种合成的报告基团和亲和配基的特性,使得Halo标签蛋白能够用于检测和亲和结合或固相化固定目的蛋白。


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