细胞器标记物可以清晰地反映该亚细胞结构的位置甚至形状,在荧光实验中尤为重要!
那么,常见的、典型的细胞器标记物有哪些呢?
一、细胞核(Nucleus)
1.染色标志物:
①EthD-1,用于死细胞染色,与细胞核结合后,呈红色荧光
②Hoechst,用于活细胞染色,与细胞核中的DNA结合,呈蓝色荧光
③DAPI,用于特异性染色细胞核,呈蓝色荧光
2.特点及用途:
通常通过与DNA特异性结合来显示细胞核的位置和状态,常用于细胞周期分析、细胞凋亡检测、核形态分析等。
3.注意事项:
需要注意避光处理以避免荧光褪色,同时根据实验样本的特性选择适合的染色剂和固定条件。
二、细胞骨架(Cytoskeleton)
1.染色标志物:
①Phalloidin,一种标记剂,能特异性结合肌动蛋白,呈绿色荧光
②α-Tubulin,一种骨架蛋白,有多种亚型,呈绿色荧光
③Vimentin,一种中间纤维蛋白,常用作间质性细胞、肌肉细胞成纤维细胞等的染色标志物,呈棕色显色
2.特点及用途:
细胞骨架染色标志物具有高灵敏度和特异性,可有效识别和定位目标蛋白,而不会受到其他蛋白质的干扰,常用于细胞形态和结构、细胞运动和分裂、细胞成像和追踪等研究。
3.注意事项:
选择适当的固定剂和渗透剂,以确保细胞结构的稳定性;适时终止染料的作用,以避免过度染色导致细胞损伤。
三、内质网(Endoplasmic Reticulum)
1.染色标志物:
①ER-Tracker,一种小分子荧光染料,其分子结构中含有能够与内质网特异性结合的基团,呈红色荧光
②Calnexin,一种钙结合蛋白,可与未折叠的蛋白结合并使其留在内质网中
③PDI,一种内质网蛋白质,具有蛋白质二硫键异构酶活性,参与蛋白质的折叠和装配
2.特点及用途:
常用于观察内质网形态结构、研究内质网功能、分析内质网应激反应。
3.注意事项:
需要避免高温与机械应力,以保护内质网的结构
四、线粒体(Mitochondria)
1.染色标志物:
①Mito Tracker染料,一种阳离子染料,用于线粒体定位,呈绿色/红色荧光
②JC-1,一种荧光探针,可检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位,呈绿色/红色荧光
③TMRM,一种能透过细胞的染料,可在具有完整膜电位的活性线粒体中累积,呈橙色荧光
2.特点及用途:
线粒体染色标志物具有高稳定性,适用于观察线粒体的形态、数量和功能状态。
3.注意事项:
线粒体荧光染料对光敏感,操作时需在弱光条件下完成,避免荧光信号褪色。
五、溶酶体(Lysosome)
1.染色标志物:
①LysoTracker染料,一种可透过细胞、不可固定的红色荧光染料,可对细胞内的酸性区室进行染色
②LAMP1,一种糖基化膜蛋白,富集于溶酶体膜上,呈红色荧光
③Cathepsin D,一种溶酶体蛋白酶,可降解酸性区室中的底物,呈红色荧光
2.特点及用途:
溶酶体染色标志物具有特异性强、可重复性好等特点,可用于动态观察溶酶体的运动和形态变化。
3.注意事项:
染色过程中可能会出现背景染色较高的情况,需要适当增加清洗次数、优化染色剂的浓度和孵育时间,或使用一些背景抑制剂,来减少背景干扰。
六、高尔基体(Golgi Apparatus)
1.染色标志物:
①Golgi-Tracker,一种高尔基体红色荧光探针,可用于活细胞高尔基体特异性荧光染色
②GM130,一种高尔基体骨架蛋白,与高尔基体膜紧密结合,呈绿色荧光
③Giantin,一种大型中间体膜蛋白,主要位于高尔基体的结构中
2.特点及用途:
高尔基体染色标志物具有较高的特异性,能选择性地与高尔基体膜上的特定蛋白质结合,从而标记出高尔基体的位置。
3.注意事项:
由于高尔基体对温度、光较为敏感,需避免在过冷/过热的环境中操作,还需避免长时间暴露在光线下,以防止荧光淬灭。
七、过氧化物酶体(Peroxisome)
1.染色标志物:
①Peroxisome-Tracker,一种活细胞过氧化物酶体标记染料,呈绿色荧光
②Catalase,一种重要的抗yang化酶,可催化过氧化氢分解为氧和水,呈红色荧光
③PMP70,一种跨膜蛋白,用于检测数量和结构,呈红色荧光
2.特点及用途:
过氧化物酶体染色标志物具有特异性强、灵敏度高等特点,要用于检测细胞内过氧化物酶体的分布和活性。
3.注意事项:
避免接触强氧化剂,以保护过氧化物酶体免受氧化应激的影响;还需确保室温、弱光环境操作。
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