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实验外包——线粒体膜电位(JC-1)检测实验流程介绍

作者:admin 浏览量:5 来源:本站 时间:2025-10-03 07:39:46

信息摘要:

线粒体膜电位(JC-1)实验流程线粒体膜电位是反映线粒体功能的重要指标,常用JC-1染料检测,以下是基于此的实验流程:实验准备:准备细胞培养所需材料,如细胞株、培养基、血清、胰酶、无菌PBS等;准备检测线粒体膜电位的相关试剂,如JC-1染色工作液、阳性对照试剂(如CCCP);准备实验器材,如细胞培养瓶、96孔板、离心机、


线粒体膜电位JC-1)实验流程

线粒体膜电位是反映线粒体功能的重要指标,常用JC-1染料测,以下是基于此的实验流程:

实验准备:准备细胞培养所需材料,如细胞株、培养基、血清、胰酶、无菌PBS等;准备检测线粒体膜电位的相关试剂,如JC-1染色工作液、阳性对照试剂(如CCCP);准备实验器材,如细胞培养瓶、96孔板、离心机、荧光显微镜酶标仪

细胞培养:将细胞接种于细胞培养瓶中,加入适量培养基,置于37℃、5%CO₂培养箱中培养,待细胞生长至对数生长期。

细胞接种:用胰酶消化细胞,制成单细胞悬液,计数后将细胞接种到96孔板中,每孔接种适量细胞,置于培养箱孵育,使细胞贴壁。

实验分组:将96孔板分为正常对照组、阳性对照组和实验组,阳性对照组加入适量CCCP溶液,实验组加入不同处理因素,正常对照组加入等体积的培养基,每组设置多个复孔。

染色:孵育结束后,小心吸去各孔培养基,用预热的PBS轻轻洗涤细胞2-3次;每孔加入适量JC-1染色工作液,37℃孵育20-30分钟;孵育结束后,吸去染色工作液,用PBS洗涤细胞2-3次,去除未结合的JC-1染料。

检测:使用荧光显微镜观察细胞染色情况,绿色荧光代表JC-1单体,红色荧光代表JC-1聚合物;也可用酶标仪检测,分别测定激发波长为488nm、发射波长为530nm(检测JC-1单体)和激发波长为530nm、发射波长为590nm(检测JC-1聚合物)时的荧光强度,计算红色荧光强度与绿色荧光强度的比值,评估线粒体膜电位。

数据分析:采用合适的统计方法对实验数据进行分析,判断不同处理组之间线粒体膜电位是否存在显著差异。


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