高尔基染色是一种经典的神经组织染色方法,以下从其原理、操作步骤、等方面进行介绍:
染色原理
银 Golgi 染色原理:浸泡脑组织的重铬酸钾溶液与硝酸银溶液发生反应,生成黑色的铬酸银沉淀,由于组织的嗜银性而沉积于神经细胞中。
汞 Golgi 染色原理:使用重铬酸钾和氯化汞的混合物,并加入铬酸钾来调节溶液酸性,形成黑色硫化汞和一些金属的复杂氧化物沉积物,这些沉积物因组织的嗜银性而沉积在神经细胞中,使得神经细胞的结构得以可视化。
操作步骤
取材固定:实验动物处死前深度麻醉,尽快从颅骨中剥离完整脑组织。小鼠脑组织用蒸馏水洗净后直接放入高尔基染色固定液;大鼠脑组织则需切成 5-10mm 厚的组织块,漂洗后放入固定液,常温保存运输,注意每瓶只能放一个样本。
染色:将染色固定液倒掉,更换高尔基染色液,将组织块完全浸没,放置阴凉通风处 26℃避光处理 14 天,期间浸泡 48h 后换一次新染液,之后每隔 3 天换一次新染液。
组织洗涤处理:染色完成后,倒掉染液,更换组织处理液处理 1h 后再更换一次,4℃避光处理 3 天。
振动切片:用 502 强力胶将脑组织粘在振动切片机的托盘上,以组织处理液浸没,切片厚度为 60μm,切成片后用毛刷辅助贴至玻片上,捞片后在脑组织切片表面滴加组织处理液,稍晾干后进行显影。
显影:超纯水水洗切片,滴加高尔基显影液,30min 显影后水洗。
封片:擦干载玻片上多余的水分,用甘油明胶封片,避光切片盒常温保存。